在腓尼基几个月时间的休整，公元前331年夏，亚历山大又率马其顿大军开始了对波斯帝国的征伐。这次他要征服的是波斯帝国的心脏地带，而不是像小亚细亚、腓尼基、埃及等波斯帝国的边远地区。他要寻找波斯帝国的主力部队，与他们决战，这样才能彻底消灭波斯帝国。亚历山大率领的马其顿大军有骑兵7000，步兵40000，从腓尼基出发，经大马士革和阿勒颇，向幼发拉底河进军。在位于幼发拉底河上游的萨普萨斯城，与先行到这里的帕米尼欧所率部队会合。萨普萨斯城本有波斯军队在这里驻扎，叙利亚总督马扎亚斯率3000骑兵在这里驻守。但一听马其顿大军到来，参加过伊苏斯战役的马扎亚斯知道亚历山大的利害，自知不是对手，便弃城逃走，马其顿军队未损一兵一卒就占领了该城。当亚历山大正要渡河想向巴比伦进军时，听到探马来报大流士三世正率波斯帝国主力部队在底格里斯河附近等候亚历山大前来决战。听此报告，亚历山大决定暂不进攻巴比伦，而是寻找波斯帝国主力部队与其决战。他命令军队穿越美索不达米亚平原，向底格里斯河进军。到达底格里斯河时，马其顿大军与一小股波斯骑兵部队相遇，这一小股波斯骑兵一见马其顿军队掉头就跑，亚历山大命骑兵快速追赶，抓住了一些俘虏。经过对俘虏的审讯，得知大流士三世所率波斯主力就在附近的高加米拉村。

再说大流士三世自从伊苏斯一战失败后，一路逃回巴比伦城。在此一病不起，他曾经多次致信亚历山大，请求亚历山大能够释放他的母亲、妻子和儿女们，为这他不惜割让大片领土给亚历山大。但这些都未能打动亚历山大，因为亚历山大要的是整个波斯帝国。在这同时，大流士三世收罗伊苏斯一役的残兵败将并不断向各地征召军队，他要在辽阔的美索不达米亚平原与亚历山大一决雌雄。据史书记载他征召了包括波斯、米底亚、西徐亚、巴克特利亚、印度、卡里亚、亚美尼亚、卡帕多西亚和希腊等总计100万步兵，40000骑兵。这其中包括200辆装有大弯刀的战车和15头战象。

在得知波斯军队的确切位置之后，亚历山大命令军队就地进行休整，他要让他的军队有充沛的精力来参加战斗，因为马其顿军队毕竟是经历了长途跋涉才来到这里，而波斯军队却是在以逸待劳。经过四天的休息，亚历山大将辎重部队留下，他亲率马其顿大军开赴高加米拉村，寻找波斯军队主力决战。

不久，波斯部队就出现在马其顿大军的视野，亚历山大命令部队原地休息，他召集将领们开会，商讨下一步军事行动。帕米尼欧主张先就地扎营，待对敌情有了深入了解后才作决定。亚历山大听从了帕米尼欧的建议，亲自率领侦查部队对周边环境和地势进行了侦查，一套详尽的步兵作战方案在他脑中形成。

帕米尼欧建议应乘波斯军队猝不及防，连夜偷袭波斯军队大营，亚历山大认为，马其顿军队的优势在于他的方阵军。如果夜间袭击，必定造成军队混乱，不利于发挥方阵军的优势。未采纳帕米尼欧的建议。

公元前331年10月1日，清晨，历史上著名的高加米拉战役开始前夕，马其顿士兵早早起来，吃完早饭，准备与波斯军队一战。而亚历山大却仍然大睡未醒，帕米尼欧很是着急，不顾君臣礼节，径直进入亚历山大的寝帐，将其叫醒。看着惊慌失措的帕米尼欧，亚历山大面带微笑，从容地与这位老将说：“不要着急

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